技術(shù)文章

當(dāng)前位置：首頁技術(shù)文章人源細(xì)胞活力檢測常用方法

人源細(xì)胞活力檢測常用方法

更新時(shí)間：2026-08-28

點(diǎn)擊次數(shù)：322

　　一、臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法(基礎(chǔ)常規(guī)法)

　　原理

　　細(xì)胞膜完整的活細(xì)胞可阻擋臺盼藍(lán)進(jìn)入胞內(nèi)，細(xì)胞無色；凋亡、壞死細(xì)胞細(xì)胞膜破損，染料滲入胞質(zhì)被染成藍(lán)色，通過計(jì)數(shù)區(qū)分活死細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞活率。

　　操作流程

　　消化收集人源細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液；

　　細(xì)胞懸液與 0.4% 臺盼藍(lán)溶液按 1:1 混勻；

　　滴加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡下分別統(tǒng)計(jì)活細(xì)胞、死細(xì)胞數(shù)量；

　　計(jì)算公式：細(xì)胞活力 = 活細(xì)胞總數(shù) ÷(活細(xì)胞 + 死細(xì)胞)×100%。

　　優(yōu)缺點(diǎn)

　　操作簡單、成本低，實(shí)驗(yàn)室日常傳代、凍存前用；僅能瞬時(shí)檢測，無法定量細(xì)胞增殖活性，靈敏度偏低。

　　二、CCK-8 檢測法(高通量定量選擇)

　　原理

　　CCK-8 試劑含水溶性四唑鹽，僅能被活細(xì)胞線粒體內(nèi)脫氫酶還原，生成橙黃色可溶性甲瓚產(chǎn)物，產(chǎn)物吸光度與活細(xì)胞數(shù)量呈線性相關(guān)，酶標(biāo)儀測 450nm 吸光值反映細(xì)胞活力。

　　適用場景

　　人源腫瘤細(xì)胞、正常組織細(xì)胞藥物毒性、增殖、抑制實(shí)驗(yàn)高通量篩選。

　　優(yōu)勢

　　毒性低，無需裂解細(xì)胞，可同一塊 96 孔板連續(xù)檢測；靈敏度遠(yuǎn)高于 MTT，重復(fù)性好。

　　三、MTT 比色法

　　原理

　　MTT 被活細(xì)胞線粒體還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲瓚結(jié)晶，需加入 DMSO 溶解結(jié)晶，檢測吸光度定量活細(xì)胞數(shù)量。

　　優(yōu)缺點(diǎn)

　　試劑價(jià)格低廉；缺點(diǎn)是甲瓚不溶，操作多一步溶解步驟，DMSO 有細(xì)胞毒性，檢測后細(xì)胞無法繼續(xù)培養(yǎng)。

　　四、LDH 乳酸脫氫酶釋放法(檢測細(xì)胞損傷壞死)

　　原理

　　LDH 穩(wěn)定存在于細(xì)胞胞質(zhì)，活細(xì)胞幾乎不釋放；細(xì)胞受損裂解后 LDH 釋放至培養(yǎng)基，通過酶促顯色反應(yīng)測上清 LDH 含量，間接判定細(xì)胞損傷程度、細(xì)胞活力。

　　特點(diǎn)

　　不破壞細(xì)胞，取上清即可檢測，多用于人源細(xì)胞氧化損傷、藥物溶毒、補(bǔ)體殺傷實(shí)驗(yàn)。

　　五、ATP 熒光檢測法(高靈敏快速檢測)

　　原理

　　活細(xì)胞內(nèi) ATP 含量穩(wěn)定，壞死細(xì)胞 ATP 快速降解；熒光素 - 熒光素酶體系與 ATP 反應(yīng)產(chǎn)生熒光，熒光強(qiáng)度正比于活細(xì)胞 ATP 總量，快速定量細(xì)胞活力。

　　優(yōu)勢

　　檢測速度極快，靈敏度極高，適合微量人源細(xì)胞、3D 細(xì)胞球活力檢測。

　　六、流式細(xì)胞術(shù)雙染法(精準(zhǔn)區(qū)分活 / 凋亡 / 壞死細(xì)胞)

　　常用組合：Annexin V-FITC + PI 雙染

　　Annexin V 結(jié)合凋亡細(xì)胞膜外翻磷脂酰絲氨酸，標(biāo)記早期凋亡細(xì)胞；

　　PI 無法穿透完整活細(xì)胞膜，僅染晚期壞死、破損細(xì)胞；

　　優(yōu)勢

　　可同時(shí)區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡、晚期壞死三類細(xì)胞，數(shù)據(jù)精準(zhǔn)，適合細(xì)胞凋亡機(jī)制研究、原代人源細(xì)胞檢測。

　　七、Calcein-AM/PI 活死細(xì)胞熒光染色(熒光成像觀察)

　　原理

　　Calcein-AM 無熒光，穿透活細(xì)胞后被酯酶水解生成帶綠色熒光的 Calcein；PI 紅色熒光標(biāo)記破損死細(xì)胞，熒光顯微鏡直接成像觀察細(xì)胞存活狀態(tài)。

　　適用

　　人源原代細(xì)胞、共培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞爬片形態(tài)可視化活力觀察。

　　各類方法選用建議

　　細(xì)胞傳代、凍存質(zhì)控：臺盼藍(lán)染色；

　　藥物篩選、增殖定量：CCK-8；

　　細(xì)胞損傷、毒性釋放：LDH 釋放實(shí)驗(yàn)；

　　凋亡分層定量：流式 Annexin V/PI 雙染；

　　熒光鏡下直觀觀察：Calcein-AM 活死雙熒光染色。

欧洲无码一区二区三区在线观看久久精品人人做人人爽婷婷精品国产亚洲AV麻豆不片欧美日韩国产综合草草

人源細(xì)胞活力檢測常用方法